靶向DNA甲基化：DNA甲基化分析方法的發(fā)展

　　靶向DNA甲基化廠家表示，DNA甲基化在真核生物中提供了一個關(guān)鍵的表觀遺傳調(diào)控層，在健康和疾病的許多生物學(xué)過程中具有重要意義。DNA中胞嘧啶堿基甲基化的功能初期被認為是一種“沉默”的表觀遺傳標記，幾十年來一直集中在基因的啟動子區(qū)域。隨著技術(shù)升級和研究積累，對DNA甲基化作用的認識已經(jīng)擴展到各種基因組環(huán)境，包括基因組、重復(fù)序列和轉(zhuǎn)錄起始位點。然而，描述DNA甲基化模式的需求催生了針對其基因組分布的多種DNA甲基化分析技術(shù)，這些技術(shù)可以從限定區(qū)域內(nèi)特點的單堿基分辨率，在基因組水平上檢測DNA甲基化。本文綜述了主要基于DNA樣品前處理的不同DNA甲基化分析技術(shù):亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化、核酸內(nèi)切酶消化和親和富集，包括方法學(xué)的發(fā)展、原理、應(yīng)用和相對優(yōu)勢。

　　靶向DNA甲基化廠家表示，DNA甲基化分析技術(shù)的方法有很多，大致可以分為分類和分析兩大類。這兩種技術(shù)都適用于高通量應(yīng)用。當(dāng)需要研究多個樣本中的特點時，通常會使用分型技術(shù)，包括限制性內(nèi)切酶、PCR和質(zhì)譜。分型技術(shù)包括甲基化特異性PCR(MSP)、亞硫酸氫鹽測序PCR(BSP)、亞硫酸氫鹽限制性酶分析(COBRA)和亞硫酸氫鹽PCR后的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)。

　　靶向DNA甲基化廠家表示，液相色譜(LC)是一個用于定量DNA樣品中總5-甲基脫氧胞苷(5mdC)含量的全基因組DNA甲基化平臺?；旧?，DNA樣品依次或同時被脫氧核糖核酸酶、堿性磷酸酶和核酸外切酶水解。色譜分離后，基因組DNA甲基化率(MR)表示為5mdC和5mdC加脫氧胞苷(dC)之和的百分比。LC分析可以快速獲得并量化實驗的整體甲基化水平，但難以建立適用于5mdC和dC的內(nèi)標?；贚C分析的技術(shù)難點在于獲得甲基化位置的詳細信息。色譜技術(shù)仍然具有強大的生命力，當(dāng)與熒光、紫外和質(zhì)譜聯(lián)用時，可以提高靈敏度。在這些改進中，LC/MS為全基因組DNA甲基化定量提供了一種準確且高度靈敏的方法。